分光光度计A260A280 6030 比值所代表意义

发布者:admin 发布时间:2019-10-24 14:46 浏览次数:

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  [交流]分光光度计A260/A280 A260/A230 比值所代表意义

  虽然这篇文章有些小问题第二点说纯DNA的A260/A280比值为1.8,纯RNA为2.0,但在第五点又说是2.0与2.5?但是其他地方的分析还是能够带来一些帮助的。

  其实网上也很多A260/A280的区间,1.6-2.0;1.6-1.8;1.7-1.9;1.8-2.0但他们都没有明确溶液的状态,是TE还是水?pH值多少?0.1个pH值的改变能够引起A260/A280较大幅度的改变。在qiagen的DNA实验方案及应用里有两处提到DNA纯度问题,第一个是3/16:在10mM Tris-Cl、pH8.5条件下,纯净的DNA的A260/A280比率为1.8~2.0之间。第二处是10/16:在10mM Tris-Cl、pH7.5条件下,纯净的DNA的A260/A280比率为1.7~1.9之间。但是qiagen里没有具体提到A260/A230的情况。不过在invitrogen的PureLink(TM)Genomic DNA Kits中有提到他们的标准是:A260/A280比率为1.7~1.9同时A260/A230在2.0~2.5但是血液样本偏低些是1.8以上。

  但平时我们做实验也会发现其实在A260/A280值稍好的情况下,A260/A230不在这个区间对PCR似乎也未有大的影响。PCR体系本身就有一定的抗污染能力,而且一般上样量少,所以影响有限。如果是乙肝这类上样量至少20ul或者占体系一半的,可能就会有相对明显的效果。

  最后吐槽一个,无论是Tiangen还是qiagen或其他的TE,在我这的紫外分光光度计测OD230均很高。qiagen的说明书还会明确说使用前1比3稀释后测OD,但是Tiagen完全不提,在不稀释的情况下基本都是一堆++++,Tiangen的还说他们的TE就是在这款机器上不行,这。。。。。。不知道各位是否也有这情况,还是真如他们所说。。。。。


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